仅供科研使用,不得用于医学诊断。
使用前仔细阅读本说明书。
用 途:
用于定量检测猪血清、血浆及相关液体样本中金属硫蛋白(MT)的含量。
工作原理
本试剂盒采用双位点夹心酶联免疫吸附法(ELISA),测定样品中猪金属硫蛋白(MT)的水平。向预先包被猪金属硫蛋白(MT)抗体的酶标孔中加入标准品、待测样本和HRP标记的金属硫蛋白(MT)抗体,经过温育和洗涤,去除未结合的组分,然后再加入底物A、B,产生蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅与样品中猪金属硫蛋白(MT)的浓度呈正相关。
试剂盒组成
1 | 标准品(500ng/ml) | 0.5ml | 7 | 显色剂A液 | 6ml |
2 | 标准品稀释液 | 6mL | 8 | 显色剂B液 | 6ml |
3 | 酶标包被板 | 12孔×8条 | 9 | 终止液 | 6ml |
4 | 酶标试剂 | 6ml | 10 | 说明书 | 1份 |
5 | 20×浓缩洗涤液 | 25ml | 11 | 封板膜 | 2张 |
6 | 样品稀释液 | 6ml | 12 | 密封袋 | 1个 |
注:标准品用标准品稀释液依次稀释为:500、250、125、62.5、31.2、0ng/ml
需要而未提供的试剂和器材
1. 37℃恒温箱。
2. 标准规格酶标仪。
3. 精密移液器及一次性吸头
4. 蒸馏水,
5. 一次性试管
6. 吸水纸
注意事项
1. 从2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差
3. 建议所有标准品、样本都做双份检测。
4. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
5. 为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
6. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
7. 底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。
洗板方法
手工洗板方法:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。
自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中
标本要求
1.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
操作程序
1. 分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准品孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品孔中加入标准品50μl;在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。轻轻晃动混匀,37℃温育60分钟。
2. 弃去液体,甩干,每孔加满稀释后洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。
3. 每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
4. 取出酶标板,每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
5. 测定:以空白孔调零,在450nm波长下测量各孔的吸光度值(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
6. 根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了的,其实际浓度应该乘以总稀释倍数。
操作程序总结:
准备试剂,样品和标准品
加入准备好的样品、标准品和酶标试剂,37℃反应60分钟
洗板5次,加入显色液A、B,37℃显色15分钟
加入终止液
15分钟之内读OD值
计算
检测范围:7.8 ng/ml -500ng/ml。
规格: 96T/盒
保存: 2-8℃
有效期: 6个月(2-8℃)。
上海博耀生物科技有限公司
茅 勇:,