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技术文章  
猪白介素2(IL-2)定量检测试剂盒
点击次数:2371 发布时间:2012-07-26

仅供科研使用,不得用于医学诊断。

使用前仔细阅读本说明书。

     用于定量检测猪血清、血浆及相关液体样本中白介素2IL-2的含量。

工作原理

本试剂盒采用双位点夹心酶联免疫吸附法(ELISA),测定样品中猪白介素2IL-2的水平。向预先包被猪白介素2IL-2抗体的酶标孔中加入标准品、待测样本和HRP标记的白介素2IL-2抗体,经过温育和洗涤,去除未结合的组分,然后再加入底物AB,产生蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅与样品中猪白介素2IL-2的浓度呈正相关

试剂盒组成 

1

标准品(2000pg/ml

0.5ml 

7

显色剂A

6ml

2

标准品稀释液

6mL

8

显色剂B

6ml

3

酶标包被板

12×8

9

终止液

6ml

4

酶标试剂

6ml

10

说明书

1

5

20×浓缩洗涤液

25ml

11

封板膜

2

6

样品稀释液

6ml

12

密封袋

1

注:标准品用标准品稀释液依次稀释为:200010005002501250 pg/ml

需要而未提供的试剂和器材

1. 37恒温箱。

2. 标准规格酶标仪。

3. 精密移液器及一次性吸头

4. 蒸馏水,

5. 一次性试管

6. 吸水纸

注意事项

1. 2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差

3. 建议所有标准品、样本都做双份检测。

4. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

5. 为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜

6. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

7. 底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。

洗板方法

手工洗板方法:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。

自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中

标本要求 

1不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

2标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

操作程序

1. 分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准品孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品孔中加入标准品50μl;在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。轻轻晃动混匀,37℃温育60分钟。

2. 弃去液体,甩干,每孔加满稀释后洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。

3. 每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

4. 取出酶标板,每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

5. 测定:以空白孔调零,在450nm波长下测量各孔的吸光度值(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

6. 根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了的,其实际浓度应该乘以总稀释倍数。

操作程序总结

准备试剂,样品和标准品 

加入准备好的样品、标准品和酶标试剂,37℃反应60分钟

洗板5次,加入显色液AB37℃显色15分钟

加入终止液

15分钟之内读OD

计算

检测范围:31.2pg/ml-2000pg/ml

规格:    96T/

保存:    2-8 

有效期:  6个月(2-8℃)。

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